Resonanz -Raman -Spektroskopie
Resonanz -Raman -Spektroskopie (RR -Spektroskopie) ist ein Raman -Spektroskopie Technik, bei der der Vorfall Photon Energie ist energie für eine energie elektronischer Übergang einer Verbindung oder eines untersuchten Materials.[1] Der Frequenz Zufall (oder Resonanz) kann zu einer stark verbesserten Intensität der Raman -Streuung, was das Studium erleichtert Chemische Komponenten bei niedrigen Konzentrationen vorhanden.[2]
Raman -Streuung ist normalerweise extrem schwach, da nur etwa 1 von 10 Millionen Photonen, die eine Probe treffen, mit einem Verlust verstreut sind (Verlust (Stokes) oder Gewinne (Anti-Stokes) in Energie durch Veränderungen der Schwingungsenergie des Moleküle in der Probe; Der Rest der Photonen ist ohne Veränderung der Energie verstreut. Resonanzverstärkung der Raman -Streuung erfordert die einfallende Wellenlänge (normalerweise von a Laser-) nahe an dem eines elektronischen Übergangs der Moleküle zu sein. In größeren Molekülen kann die Änderung der Elektronendichte weitgehend auf einen Teil der beschränkt werden Molekül, a Chromophorund in diesen Fällen stammen die verbesserten Raman -Bänder hauptsächlich aus den Teilen des Moleküls, in denen der elektronische Übergang zu einer Änderung der Bindungslänge oder einer Kraftkonstante im angeregten Zustand der führt Chromophor. Für große Moleküle wie z. ProteineDiese Selektivität hilft, die beobachteten Bänder als stammend zu identifizieren Schwingungsmodi von bestimmten Teilen der Molekül oder Protein, so wie die Hem Einheit innerhalb Myoglobin.[3]
Überblick
Raman -Spektroskopie und RR -Spektroskopie liefern Informationen über die Schwingungen von Moleküleund kann auch zur Identifizierung unbekannter Substanzen verwendet werden. Die RR -Spektroskopie hat eine breite Anwendung auf die Analyse von gefunden bioinorganisch Moleküle. Die Technik misst die Energie erforderlich, um den Schwingungszustand eines Moleküls zu ändern, wie es tut Infrarot -Spektroskopie. Die Mechanismus- und Auswahlregeln unterscheiden sich in jeder Technik, Bandpositionen sind jedoch identisch und daher liefern die beiden Methoden ergänzende Informationen.
Infrarot-Spektroskopie beinhaltet die Messung der direkten Absorption von Photonen mit der geeigneten Energie zum Erregen molekulare Bindung Schwingungsmodi und Phononen. Das Wellenlängen dieser Photonen liegen in der Infrarot Region der Spektrumdaher der Name der Technik. Raman -Spektroskopie misst die Anregung von Bindungsschwingungen durch eine Unelastische Streuung Prozess, bei dem die einfallenden Photonen energischer sind (normalerweise im sichtbaren, ultravioletten oder sogar Röntgenbereich) und verlieren (oder im Fall von Gewinn Anti-Stokes Raman Streuung) Nur ein Teil ihrer Energie für die Probe. Die beiden Methoden sind komplementär, da einige Schwingungsübergänge, die in der IR -Spektroskopie beobachtet werden, in der Raman -Spektroskopie nicht beobachtet werden und umgekehrt. Rr Spektroskopie ist eine Ausdehnung der herkömmlichen Raman -Spektroskopie, die eine erhöhte Empfindlichkeit gegenüber spezifischen (farbigen) Verbindungen liefern kann, die bei niedrigen Konzentrationen (mikro bis Millimolar) in einem ansonsten komplexen Gemisch von Verbindungen vorhanden sind.
Ein Vorteil der Resonanz -Raman -Spektroskopie gegenüber (normaler) Raman -Spektroskopie besteht darin, dass die Intensität der Banden um mehrere Größenordnungen erhöht werden kann. Eine Anwendung, die diesen Vorteil zeigt, ist die Untersuchung der Dioxygen -Einheit in Cytochrom -C -Oxidase. Die Identifizierung der mit der O -O -Dehnungschwingung verbundenen Bande wurde durch Verwendung bestätigt 18Ö-16O und 16Ö-16O Isotopologen.[4]
Grundtheorie

Die Frequenzen von molekulare Schwingungen reichen von weniger als 1012 bis ungefähr 1014 Hz. Diese Frequenzen entsprechen der Strahlung in der Infrarot (IR) -Region der Infrarot (IR) elektromagnetisches Spektrum. Zu jedem Zeitpunkt hat jedes Molekül in einer Probe eine gewisse Schwingungsenergie. Die Menge an Schwingungsenergie, die ein Molekül aufgrund von Kollisionen und anderen Wechselwirkungen mit anderen Molekülen in der Probe kontinuierlich verändert.
Bei Raumtemperatur sind die meisten Moleküle am niedrigsten Energiezustand-bekannt als Grundzustand. Einige Moleküle sind in höheren Energiezuständen - bekannt als aufgeregte Zustände. Der Anteil der Moleküle, die einen bestimmten Schwingungsmodus bei einer bestimmten Temperatur besetzen Boltzmann -Verteilung. Die Durchführung einer solchen Berechnung zeigt, dass für relativ niedrige Temperaturen (wie die für die meisten Routinespektroskopie verwendeten) die meisten Moleküle den Bodenschwingungszustand belegen (außer im Fall von Niederfrequenzmodi). Ein solches Molekül kann durch die direkte Absorption eines Photons der geeigneten Energie auf einen höheren Schwingungsmodus angeregt werden. Dies ist der Mechanismus, durch den die IR -Spektroskopie funktioniert: Infrarotstrahlung wird durch die Probe geleitet, und die Intensität des übertragenen Lichts wird mit dem des einfallenden Lichts verglichen. Eine Verringerung der Intensität bei einer bestimmten Lichtwellenlänge zeigt die Absorption von Energie durch einen Schwingungsübergang an. Die Energie, von a Photon ist
wo ist Plancks Konstante und ist der Frequenz des Strahlung. Somit kann die für einen solchen Übergang erforderliche Energie berechnet werden, wenn die Häufigkeit der einfallenden Strahlung bekannt ist.
Es ist auch möglich, molekulare Schwingungen von einem zu beobachten Unelastische Streuung Prozess, Stokes Raman Streuung ist ein solcher Prozess. Ein Photon wird mit niedrigerer Energie absorbiert und dann erneut ausgegeben (verstreut). Der Energieunterschied zwischen den absorbierten und wiederempfindlichen Photonen entspricht der Energie, die erforderlich ist, um ein Molekül zu einem höheren Schwingungsmodus zu erregen. Anti-Stokes-Raman-Streuung ist ein weiterer unelastischer Streuprozess und tritt nur aus Molekülen auf, die in angeregten Schwingungszuständen beginnen. Es führt zu Licht mit höherer Energie. Licht verstreut elastisch (keine Energieänderung zwischen den eingehenden Photonen und den wiederempfindlichen/verstreuten Photonen) ist als bekannt als Rayleigh Streuung.
Im Allgemeinen wird der Energieunterschied als Unterschied in aufgezeichnet Wellenzahl () zwischen dem Laserlicht und dem verstreuten Licht, das als Raman -Verschiebung bekannt ist. Ein Raman -Spektrum wird erzeugt, indem die Intensität des verstreuten Lichts gegenüber dem Auftragen des verstreuten Lichts aufgetragen wird .
Wie die Infrarotspektroskopie kann die Raman -Spektroskopie verwendet werden, um chemische Verbindungen zu identifizieren, da die Werte von sind auf verschiedene chemische Spezies (ihren sogenannten chemischen Fingerabdruck). Dies liegt daran, dass die Frequenzen von Schwingungsübergänge hängen von den Atommassen und den Bindungsstärken ab. Somit kann man mit einer Datenbank mit Spektren aus bekannten Verbindungen eindeutig viele verschiedene bekannte chemische Verbindungen basierend auf einem Raman -Spektrum identifizieren. Die Anzahl der Schwingungsmodi skaliert mit der Anzahl der Atome in einem Molekül, was bedeutet, dass die Raman -Spektren aus großen Molekülen kompliziert sind. Zum Beispiel, Proteine enthalten typischerweise Tausende von Atomen und haben daher Tausende von Schwingungsmodi. Wenn diese Modi ähnliche Energien haben (), dann kann das Spektrum unglaublich überfüllt und kompliziert sein.
Nicht alle Schwingungsübergänge sind Raman aktiv, was bedeutet, dass einige Schwingungsübergänge im Raman -Spektrum nicht erscheinen. Dies liegt an der Spektroskopie Auswahlregeln Für Raman -Spektren. Im Gegensatz zur IR -Spektroskopie kann ein Übergang nur ersichtlich sein, wenn diese bestimmte Schwingung eine Nettoveränderung in verursacht Dipolmoment des Moleküls in der Raman -Spektroskopie nur wechselhaft Polarisierbarkeit des Moleküls entlang der Schwingungskoordinate können beobachtet werden. Dies ist der grundlegende Unterschied in der Art und Weise, wie IR- und Raman -Spektroskopie auf die Schwingungsübergänge zugreifen. In der Raman-Spektroskopie verursacht das eingehende Photon eine momentane Verzerrung der Elektronenverteilung um eine Bindung in einem Molekül, gefolgt von einer Wiedereinstellung der Strahlung, wenn die Bindung in ihren normalen Zustand zurückkehrt. Dies führt vorübergehend Polarisation der Bindung und einem induzierten Dipol, der bei der Entspannung verschwindet. In einem Molekül mit einem Symmetriezentrum wird eine Änderung des Dipols durch Verlust des Symmetriezentrums erreicht, während eine Änderung der Polarisierbarkeit mit der Erhaltung des Symmetriezentrums vereinbar ist. In einem zentrosymmetrischen Molekül sind asymmetrische Dehnung und Biegung IR -aktiv und Raman inaktiv, während symmetrisches Dehnen und Biegen Raman aktiv und ir inaktiv sind. Daher in einem zentrosymmetrischen Molekül,, IR- und Raman -Spektroskopie schließen sich gegenseitig aus. Für Moleküle ohne Symmetriezentrum kann jeder Schwingungsmodus IR -aktiv, Raman aktiv sein, beides oder beides. Symmetrische Strecken und Biegungen sind jedoch tendenziell Raman aktiv.
Theorie der Resonanz -Raman -Streuung
In der Resonanz -Raman -Spektroskopie fällt die Wellenlänge der eingehenden Photonen mit einem zusammen elektronischer Übergang des Moleküls oder des Materials. Die elektronische Anregung eines Moleküls führt zu strukturellen Veränderungen, die sich in der Verbesserung der Raman -Streuung bestimmter Schwingungsmodi widerspiegeln. Schwingungsmodi, die während der elektronischen Anregung eine Änderung der Bindungslänge und/oder -kraftkonstante durchlaufen, können einen großen Anstieg der Polarisierbarkeit und damit der Raman -Intensität zeigen. Dies ist als Tsubois Regel bekannt, die eine qualitative Beziehung zwischen der Natur eines elektronischen Übergangs und dem Verbesserungsmuster in der Resonanz -Raman -Spektroskopie ergibt.[5] Der Verbesserungsfaktor kann um den Faktor von 10 bis> 100.000 sein und ist im Fall von π-π* -Ransitionen am deutlichsten und am wenigsten für Metallzentrum (D - D) Übergänge.[6]
Es gibt zwei primäre Methoden, mit denen die Raman -Verbesserung der Resonanz quantitativ verstehen. Dies sind die Transformationstheorie, die von entwickelt wurde von Albrecht und die zeitabhängige Theorie, die von entwickelt wurde von Heller.[7]
Anwendungen
Die selektive Verbesserung der Raman -Streuung aus bestimmten Modi unter Resonanzbedingungen bedeutet, dass Resonanz -Raman -Spektroskopie besonders für große Biomoleküle mit nützlich ist Chromophoren in ihre Struktur eingebettet. In solchen Chromophoren führt die Resonanzstreuung aus elektronischen Übergängen des Metallkomplexes (CT) im Allgemeinen zu einer Verbesserung von Metall-Ligand Dehnungsmodi sowie einige der mit den Liganden verbundenen Modi allein. Daher in einer Biomolekül wie z. HämoglobinDas Stimmen des Lasers auf nahe dem elektronischen Übergang des Ladungstransfer des Eisenzentrums führt zu einem Spektrum, das nur die mit dem verbundenen Dehnungs- und Biegemodi widerspiegelt Tetrapyrrol-Eisengruppe. Infolgedessen ermöglicht uns in einem Molekül mit Tausenden von Schwingungsmodi die RR -Spektroskopie, relativ wenige Schwingungsmodi gleichzeitig zu betrachten. Das Raman -Spektrum eines Proteins, das möglicherweise Hunderte von Peptidbindungen enthält, aber nur ein einzelnes Porphyrinmolekül, kann nur die mit dem Porphyrin assoziierten Schwingungen zeigen. Dies verringert die Komplexität des Spektrums und ermöglicht eine einfachere Identifizierung eines unbekannten Proteins. Wenn ein Protein mehr als ein Chromophor hat, können verschiedene Chromophore einzeln untersucht werden, wenn sich ihre CT -Banden in der Energie unterscheiden. Zusätzlich zur Identifizierung von Verbindungen kann die RR -Spektroskopie in einigen Fällen auch strukturelle Identifizierung über Chromophore liefern.
Der Hauptvorteil der RR-Spektroskopie gegenüber nicht-resonanten Raman-Spektroskopie ist der große Anstieg der Intensität der fraglichen Banden (um bis zu einem Faktor von 106). Dies ermöglicht es RR -Spektren, mit Probenkonzentrationen von nur 10 zu erhalten–8 M. Es ermöglicht es auch, Raman-Spektren kurzlebiger angeregter Zustandsarten aufzuzeichnen, wenn gepulste Laser werden verwendet.[8] Dies steht in starkem Gegensatz zu nicht resonanten Raman-Spektren, die normalerweise Konzentrationen von mehr als 0,01 M. RR-Spektren benötigen Übergänge, mit denen der Laser resonant ist. Da die RR-Spektroskopie typischerweise mit Lasern bei sichtbaren und nahezu UV-Wellenlängen erhalten wird, ist es wahrscheinlicher, dass Spektren durch Fluoreszenz beeinflusst werden. Darüber hinaus kann der Photoabbau (Photobleichung) und Erwärmung der Probe auftreten, wenn die Probe auch das Anregungslicht absorbiert und die Energie als Wärme abgeleitet hat.
Instrumentierung

Die für die Resonanz -Raman -Spektroskopie verwendete Instrumentierung ist identisch mit der für die Raman -Spektroskopie verwendete; Speziell ein hochmonochromatisch Lichtquelle (ein Laser) mit einer Emissionswellenlänge im Nahinfrarot-, sichtbaren oder im Nah-Ultraviolettenbereich des Spektrums. Da die Energie der elektronischen Übergänge (d. H. Die Farbe) variiert, variiert stark von Verbindung zu Verbindung, Wellenlängenabstimmbare Laser, die in den frühen 1970er Jahren erschienen, sind nützlich, da sie so eingestellt werden können, dass sie mit einem elektronischen Übergang (Resonanz) zusammenfallen. Die Breitlichkeit elektronischer Übergänge bedeutet jedoch, dass viele Laserwellenlängen erforderlich sein können, und Multi-Line-Laser (Argon und Krypton Ion) werden üblicherweise verwendet. Der wesentliche Punkt ist, dass die Wellenlänge der Laseremission mit einer elektronischen Absorptionsbande der interessierenden Verbindung zusammenfällt. Die erhaltenen Spektren enthalten auch eine nicht-resonante Raman-Streuung der Matrix (z. B. Lösungsmittel).
Die Probenhandhabung der Raman -Spektroskopie bietet erhebliche Vorteile gegenüber der FTIR -Spektroskopie, in denen Glas für Fenster verwendet werden kann. Linsen, und andere optisch Komponenten. Ein weiterer Vorteil ist, dass während Wasser Absorbiert stark in der Infrarotregion, die die verwendeten Pfade begrenzt, und die große Region des Spektrums maskieren. Die Intensität der Raman-Streuung aus Wasser ist normalerweise schwach und die direkte Absorption stört nur, wenn Nahinfrarotlaser (z. B. 1064 nm) sind Gebraucht. Daher ist Wasser ein ideales Lösungsmittel. Da sich der Laser jedoch auf eine relativ geringe Punktgröße konzentriert, kann eine schnelle Erwärmung von Proben auftreten. Wenn Resonanz-Raman-Spektren aufgezeichnet werden, können Probenheizung und Photosbleichung Schäden und eine Änderung des erhaltenen Raman-Spektrums verursachen. Wenn die Absorption der Probe hoch (> OD 2) über dem Wellenlängenbereich ist, in dem das Raman-Spektrum aufgezeichnet wird, kann die innere Filtereffekte (Reabsorption der Raman-Streuung durch die Probe) die Signalintensität dramatisch verringern. Typischerweise wird die Probe in ein Röhrchen gelegt, das dann gedreht werden kann, um die Exposition der Probe gegenüber dem Laserlicht zu verringern und die Auswirkungen des Photodegrades zu verringern. Gasförmig, Flüssigkeit, und fest Proben können alle unter Verwendung der RR -Spektroskopie analysiert werden.
Obwohl verstreute Licht die Probe in alle Richtungen verlässt, wird die Sammlung des gestreuten Lichts nur über einen relativ kleinen festen Winkel durch eine Linse erreicht und auf den Spektrograph und den CCD -Detektor gerichtet. Der Laserstrahl kann in Bezug auf die optische Achse, die zur Sammlung von Raman -Streuung verwendet wird, in jedem Winkel sein. In freien Raumsystemen befindet sich der Laserpfad typischerweise in einem Winkel von 180 ° oder 135 ° (eine sogenannte Rückenstreuungsanordnung). Die 180 ° -Anordnung wird typischerweise in Raman -Sonden auf Mikroskopen und Glasfaserbasis verwendet. Andere Anordnungen umfassen den Laser, der in Bezug auf die optische Achse bei 90 ° passt. Nachweiswinkel von 90 ° und 0 ° werden seltener verwendet.
Die gesammelte verstreute Strahlung wird auf a konzentriert Spektrograph, in dem das Licht zuerst kollimiert und dann von a verteilt wird Beugungsgitter und sich auf einen neu fokussiert CCD -Kamera. Das gesamte Spektrum wird gleichzeitig aufgezeichnet und mehrere Scans können in kurzer Zeit erfasst werden, was das Signal-Rausch-Verhältnis des Spektrums durch Mittelung erhöhen kann. Verwendung dieser (oder äquivalenten) Ausrüstung und nach einem geeigneten Protokoll[9] Kann bei den absoluten Messungen für die Raman -Streuungsrate besser als 10% wiederholt werden. Dies kann nützlich sein, um Raman für die genaue Bestimmung optischer Übergänge in Strukturen mit stark Van Hove Singularitäten.[10]
Resonanz-Hyper-Raman-Spektroskopie
Resonanz-Hyper-Raman-Spektroskopie ist eine Variation der Resonanz-Raman-Spektroskopie, bei der das Ziel darin besteht, eine Anregung zu einem bestimmten Energieniveau im Zielmolekül der Probe durch ein als bekanntes Phänomen zu erreichen Zwei-Photonen-Absorption. Bei Zwei-Photonen-Absorption werden zwei Photonen gleichzeitig in ein Molekül aufgenommen. Wenn sich dieses Molekül von diesem angeregten Zustand in seinen Grundzustand entspannt, wird nur ein Photon emittiert. Dies ist eine Art Fluoreszenz.
Bei Resonanz -Raman -Spektroskopie können bestimmte Teile von Molekülen durch Einstellen der Wellenlänge des einfallenden Laserstrahls auf die „Farbe“ (Energie zwischen zwei gewünschten Elektronenquantenniveaus) des untersuchten Teils des Moleküls angegriffen werden. Dies ist als Resonanzfluoreszenz bekannt, daher die Zugabe des Begriffs „Resonanz“ zum Namen „Raman -Spektroskopie“. Einige angeregte Zustände können über eine einzelne oder doppelte Photonenabsorption erreicht werden. In diesen Fällen kann jedoch die Verwendung einer Doppelphotonenanregung verwendet werden, um mehr Informationen über diese angeregten Zustände zu erhalten als eine einzelne Photonenabsorption. Es gibt einige Einschränkungen und Konsequenzen für Resonanz -Raman- und Resonanz -Hyper -Raman -Spektroskopie.[11]
Sowohl Resonance Raman als auch Resonanz -Hyper -Raman -Spektroskopie verwenden einen einstellbaren Laser. Die Wellenlänge eines abstimmbaren Lasers kann vom Bediener auf Wellenlängen innerhalb eines bestimmten Bereichs eingestellt werden. Dieser Frequenzbereich hängt jedoch vom Design des Lasers ab. Die regelmäßige Resonanz -Raman -Spektroskopie ist daher nur empfindlich gegenüber den Elektronenergieübergängen, die dem des im Experiment verwendeten Lasers entsprechen. Die molekularen Teile, die durch normale Resonanz -Raman -Spektroskopie untersucht werden können, sind daher auf die Bindungen beschränkt, die zufällig eine „Farbe“ haben, die irgendwo in das Spektrum der „Farben“ passt, auf die der in diesem bestimmten Gerät verwendete Laser eingestellt werden kann. Resonanz -Hyper -Raman -Spektroskopie kann hingegen Atome anregen, um Licht in Wellenlängen außerhalb des einstellbaren Bereichs des Lasers zu emittieren, wodurch der Bereich möglicher Komponenten eines Moleküls erweitert wird, das angeregt und daher untersucht werden kann.
Resonanz-Hyper-Raman-Spektroskopie ist eine der Arten der „nichtlinearen“ Raman-Spektroskopie. In der linearen Raman -Spektroskopie ist die Energiemenge, die in die Anregung eines Atoms einfließt, die gleiche Menge, die die Elektronenwolke dieses Atoms verlässt, wenn ein Photon emittiert wird und die Elektronenwolke sich bis zu seinem Grundzustand entspannt. Der Begriff nichtlinear bedeutet verringerte Emissionsenergie im Vergleich zu Eingangsenergie. Mit anderen Worten, die Energie in das System stimmt nicht mehr mit der Energie des Systems überein. Dies liegt an der Tatsache, dass der Energieeintrag in Hyper-Raman-Spektroskopie viel größer ist als die der typischen Raman-Spektroskopie. Die nichtlineare Raman-Spektroskopie ist tendenziell empfindlicher als herkömmliche Raman-Spektroskopie. Darüber hinaus kann es die Auswirkungen der Fluoreszenz erheblich reduzieren oder sogar beseitigen.[12]
Röntgen-Raman-Streuung
In dem Röntgen Region, genug Energie ist zur Herstellung verfügbar elektronische Übergänge möglich. Auf Kernebene Resonanzen, Röntgen-Raman-Streuung kann der dominierende Teil der Röntgenfluoreszenz Spektrum. Dies liegt an dem Resonanzverhalten der Kramers-Heisenberg-Formel in dem der Nenner für einfallende Energien minimiert wird, die einem Kernniveau entsprechen. Diese Art der Streuung ist auch als bekannt als Resonante unelastische Röntgenstreuung (Rixs). Im sanften Röntgenbereich wurde gezeigt, dass Rixs reflektiert wird Kristallfeldanregungen, die mit jeder anderen Technik oft schwer zu beobachten sind. Anwendung von Rixs an stark korrelierte Materialien ist von besonderem Wert, um Wissen über ihre zu erlangen elektronische Struktur. Ganz bestimmt breite Bandmaterialien wie zum Beispiel GraphitEs wurde gezeigt, dass Rixs (fast) konserviert wird Kristallimpuls und hat so verwendet als Komplementärin gefunden Bandmapping Technik.
Siehe auch
Verweise
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Weitere Lektüre
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Externe Links
- http://chemwiki.ucdavis.edu/physical_chemistry/spectroscopy/vibrational_spectroscopy/raman_spectroscopy/raman%3A_interpretation
- http://www.horiba.com/us/en/scientific/products/ramanspectroscopy/raman-academy/raman-faqs/what-ispolarised-ramanspektroscopy/
- Kelley, A.M. "Resonanz-Hyper-Raman-Spektroskopie". Universität von Kalifornien, Merced.